В настоящее время основные принципы антибиотикотерапии (раннее применение препаратов широкого спектра и их длительное применение) подвергаются пересмотру в связи с негативным (дисбиотическим) воздействием антибактериальных препаратов на аутохтонную микрофлору человека, ответственную за колонизационную резистентность кишечника (бифидо- и лактобактерии).
Одним из экспериментальных методов создания дисбиоза является селективная деколонизация [1, 2]. При этом избирательно подавляется рост условно патогенных аэробных микроорганизмов, играющих главную роль в появлении эндогенных инфекций ЖКТ, но сохраняющих бесспоровую анаэробную бифидо- и лактомикрофлору [3, 4].
С этой целью используют две группы селективно деконтаминирующнх антибиотиков, наиболее активных в отношении условно патогенных грамотрицательных бактерий:
1. аминогликозиды как мало адсорбируемые в кишечнике (0 - 2% связывания с белками,
период полувыведения из организма 2 - 2,5 часа);
2. фторхинолоны - ципрофлоксацин, ломефлоксацин (40% связывания с белками, период
полувыведения из организма 3-7 часов).
Данная экспериментальная модель позволяет получить необходимую информацию по оценке эффективности пробиотических препаратов для коррекции дисбиозов.
Материалы и методы
Изучение действия цифрана, аналога препарата «Бактиспорин» и БАД «Спирулина ВЭЛ» на пристеночную индигенную микрофлору проводили на беспородных белых мышах массой 12-14 г. Для исследования на микрофлору асептически брали 2 дотированных участка толстой кишки (10 мм), освобожденных от фекалий. Биоптат помещали в 4,5 мл холодного сывороточного бульона.
С целью суспендирования микробов взятый образец выдерживали в холодильнике 1 час. Высевы осуществляли, используя сывороточный или кровяной агар, а также различные дифференциально-диагностические среды, позволяющие проводить диагностику микроорганизма до рода. При необходимости проводили дополнительное определение физиолого-биохимических свойств.
Цифран (из группы фторхинолонов) вводили перорально в количестве 1,5 мг/мышь в объеме 0,5 мл в течение 5 дней. B.subtilis вводили мышам перорально в дозах 500 млн и 1 млрд в объеме 0,5 мл в течение 3-х дней. «Спирулину ВЭЛ» вводили в дозах 1 и 10 мг в объеме 0,5 мл. Для каждой экспериментальной группы в 3-х экспериментах использованы по 30 мышей
Контролем служили интактные мыши. Статистическую обработку результатов проводили, определяя среднее арифметическое (X) и его ошибку (m) [5].
Результаты и обсуждение
При изучении содержания пристеночной микрофлоры в толстой кишке беспородных белых мышей были получены следующие результаты.
Таблица 1. Характеристика пристеночной микрофлоры через 3 дня после введения препарата
Группа мышей
Введенный
препарат
Количество микроорганизмов (КОЕ/мл с 1 см толстой кишки, Х ± т)
Общее количество бактерий на сыворо-точном
Энтеро-бактерии 1ас+1ас-
Pseudomonas
Enterococcus
Staphylococcus (S.aureus/
S.spp)
Candida
Bifidobacteriiun
Lactobacillus
Неидентифицированные микроорганизмы
1
Цифран
1,5мг х
5дней
(6,4±
0,96)х
109
(0,8±0,11)
х106/
(0,18±0,023)
х106
(1,56±
0,21)
х103
(0,1±
0,011)
х102
(3±0,41)х
102/
(1,8±0,23)
х103
<1х10
102
(2,4±0,33)
х104
+
2
B.subtilis
5х106 клеток/ 0,5мл,
3 дня
(3,2±0,44)
х109
(1,6±0,24)
х106/(1,4±
0.19)х106
(1,04±
0,11)х
104
(0,1±
0,012)х
102
(3,7±
0,54)х102/
(0,6±
0,084)х102
<1х10
101-102
(1±0.11)х
104
+
3
B.subtilis
5х109 кле-ток/0.5мл
3 дня
(4,8±
0.72)х109
(2,4±
0,31)х106/
(0,52±0,07)
х106
(2.24±
-0,35)
х104
(5,8±
0-,87)
х103
<1х107
(0,8±0,098)
х102
<1х10
101-102
(0.8±0,1) х104
+
4
Спирулина
ВЭЛ 1мг/
0,5мл
а±0,13)х
109~
0±0,1)
*1010
(4,2±
0,70)х106/
(0,45±0,06)
х106
<1х10
<1х10
(2,5±0,37)
х102/(0,24
±0,031)х102
<1х10
102
(0,2±0,12)х104
+
5
Спирулина
ВЭЛ 10мг/
0,5мл
(4,9±0,75)
х109
(1.8±0,25)
х104/(4,8±
0,73)х106
<1х10
<1х10
(3.5±0,50)
х102/(0,3±
0,042)х102
<1х10
101
(0±0,11)
х104
+
6
Контроль
(без пре-парата)
(3,0±0,40)
х109
(1,6±0.23)
х106/(4,0±
0,65)х106
<1х10
<1х10
(3.5±0,52)
х103/(5±
0,75)х102
(0,8±
0,12)
х102
102-103
(1±0,14)
х104
+
Как видно из таблицы 1, общее количество пристеночных микроорганизмов в биоптатах толстой кишки, помещавшихся в обогащенную белками среду, в пересчете на 1см кишки, при введении препаратов составляло 3 - 6 х 109 КОЕ/мл, за исключением группы мышей, получивших 1 мг спирулины.
Аналогичное стимулирующее воздействие биомассы или культуральной жидкости спирулины в отношении некоторых микроорганизмов было выявлено нами ранее в опытах in vitro [6, 7].
Соотношение lас+ и lac- энтеробактерий в образцах колебалось в зависимости от введенного препарата. Так, под действием цифрана произошло 22-кратное снижение количества lac- энтеробактерий по сравнению с контролем. В то же время количество lас+ бактерий уменьшилось только в 2 раза.
Необходимо заметить, что соотношение 1ас+ и lac- бактерий в кишечнике интактных мышей было 1:2,5. Под действием цифрана оно стало 4:1.
B.subtilis в дозе 500x106 клеток/мышь выровнял их количественно, а в дозе 1x109 клеток соотношение стало как при введении цифрана (5:1).
Спирулина в количестве 1 мг вызвала существенное количественное изменение микроорганизмов. Численность 1ас+ и lac- микроорганизмов составила 10:1. Однако увеличение дозы спирулины резко снизило уровень 1ас+ энтеробактерий (более чем в 200 раз).
Аналогичное влияние таких же доз комплекса метаболитов спирулины было также выявлено in vitro в отношении E.coli, Shigella, Staphylococcus, Streptococcus [6].
Интересные данные получены для Pseudomonas и Enterococcus. Например, в толстой кишке при введении мышам цифрана и B.subtilis обнаружен Pseudomonas, соответственно на уровне 103 и 104, при отсутствии этого микроба в контроле. В тех же группах наблюдалось увеличение энтерококков до уровня 102-103. Количество клеток Candida выявлено только в контроле (0,8x102 КОЕ/мл).
Изучение количества стафилококковой микрофлоры выявило разницу в воздействии препаратов на S.aureus и другие Staphyilococcus spp. Наибольшая численность стафилококков отмечена у мышей в контрольной группе.
Под действием цифрана соотношение Staphylococcus aureus : Staphylococcus spp в контроле (7:1) изменилось до 1:6. B.subtilis в дозе 500х106 клеток/мышь, не вызывая снижения количества S.aureus по сравнению с контролем, почти на 1 порядок (8,3 раза) уменьшил уровень других стафилококков (соотношение видов стафилококков при этом стало 1:6).
Увеличение введенной дозы B.subtiliss до 1 млрд резко снизило численность всех стафилококков. Колоний S.aureus не выявлено, а КОЕ/мл других стафилококков снизилось в 6,25 раза, составляя соотношение (0:80). Прием спирулины (доза 1 и 10 мг/мл) несколько увеличил численность золотистого стафилококка по сравнению с контролем (10:1 и 7:1, соответственно).
Необходимо отметить, что уровень лактобактерий отмечен в пределах 104 КОЕ/мл, а бифидобакгерий – в пределах 102-103 КОЕ/мл.
По-видимому, для проведения коррекции микрофлоры при дисбиозе кишечника следует учитывать особенности действия введенного препарата не только на конкретный микроорганизм, но и на его соотношение с другой микрофлорой, в том числе, того же рода.
Литература
1. Van der Waaji D., Verhoef J. (ed). New criteria for antimicrobial therapy: maintenance of digestive tract colonization resistance. Excerpta Medica. Amsterdam-Oxford, 1979, p. 43-53.
2. Van der Waaji D. Colonization resistance of the digestive tract mechanism and clinical consequences. Die Nahrung, 1987,31:507-517.
3. Edhmd C, Nord C.E. Effect of qinolones on intestinal ecology. Drugs, 1999, 58(2), 65-70.
4. Edhmd С, Beyer G., Hiemer-Bau М., Ziege S., Lode H., Nord C.E. Comparative effects of moxif oxacin and clarithromycin on normal intestinal microtlora. Scand. J. Infect. Dis., 2000, 32(1 )A 81-85.
5. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. М.; Медгиз, 1962. -179 с.
6. Горобец О.Б. Изучение пищевых добавок из водорослей в питательных средах. Автореф. канд. мед. наук.- М; 2000.- 24 с.
7. Блинкова Л.П., Горобец О.Б., Батуро АП. Биологическая активность спирулины. – «Микробиология».- 2001.-№2.-С.114-118.
Источник: https://disbak.ru/nauchnye-publikatsii/izmenenie-sostava-pristenochnoy-mikroflory-kak-pokazatel-effektivnosti-primeneniya-lechebnyh-preparatov-pri-eksperimentalnom-disbioze.html
© ГастроПорта
